✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
آنالیز HPLC یا کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (High Performance Liquid Chromatography) یکی از روش های مهم در علم شیمی است که برای جداسازی، شناسایی و اندازه گیری مقادیر کم از مواد مورد استفاده قرار می گیرد HPLC از دو فاز ثابت و متحرک تشكيل شده است. كه فاز ثابت ممكن است جامد و يا مايع باشد و فاز متحرک مايع است. HPLC بدون شک، سریعترین رشد را در بین تمام روش های جداسازی تجزیه ای با فروش سالیانه در گستره بیلیون دلار داشته است. دلایل این رشد انفجارآمیز عبارتند از حساسیت روش، سازگاری سریع آن برای انجام اندازه گیری های کمی صحیح، شایستگی آن برای جداسازی مواد گونه های غیرفرار یا ناپایدار در مقابل گرما و مهم تر از همه، کاربرد گسترده آن برای موادی است که در صنعت، زمینه های مختلف علوم و جامعه اهمیت درجه اول را دارند.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
-
استفاده از روشHPLC بسيار آسان است.
-
مدت زمان لازم برای آناليز بسيار اندک است.
-
در سيستمHPLC دو فاز ثابت و متحرک با مكانيسم رقابتی عمل می كنند که این امر موجب انجام آناليزهای دقيق می شود.
-
در این روش برای هر گروه از تركيبات خاص، دتكتورهای انتخابی ويژه وجود دارد كه کمیت و کیفیت آناليز را به بهترين صورت ممکن افزايش می دهند.
-
تركيبات آلی ناپايدار و غیر فرار به سادگی تحت آناليز قرارمی گيرند.
-
جداسازی، خالص سازی و شناسایی پروتئین ها و ترکیبات آلی بویژه ترکیبات دارویی با این روش به خوبی انجام می گردد.
-
آناليز كمی با حساسيت و دقت زیادی امكان پذير است.
-
تعیین ساختار پلیمرها
-
مقایسه ساختار پروتئین های مختلف
-
هرگونه ناخالصی با قطبيت های مختلف، قابل تشخيص است.
-
وجود ناخالصی هایی با وزن ملكولی بسيار بالا قابل تشخيص است.
-
وجود آب در نمونه های آزمايشي مشکلی در طی آناليز بوجود نمی آورد.
-
ملكولهای آب دارای پیوند هيدروژنی قابل ارزيابی است.
-
سهولت تجديد پذيری(Reproducibility) از مزیت های عمده سيستم HPLC محسوب می شود.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
بخش های مختلف دستگاه HPLC و نحوه عملکرد آن ها در زیر شرح داده شده اند :
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
مخازن حلال
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
که در آن ها فاز متحرک و یا حلال های شست و شو دهنده ستون ریخته شده است
پمپ(Pump)
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
کار پمپ دستگاه اچ پی ال سی آنچنان که از نامش پیداست، پمپاژ حلال و یا حلال ها با فشار بسیار زیاد تا حدود 40 مگا پاسکال و یا بیشتر به سمت ستون کروماتوگرافی است. این واحد معمولا از یک تا چهار حلال را به سمت ستون پمپاژ می نماید که بسته به متد های کاری تغییر می کند. در مواقعی که از یک حلال در دستگاه HPLC استفاده می شود به آن اصطلاحا ایزوکراتیک یا تک حلاله گفته می شود. در مواقعی نیاز هست تا از ترکیب ثابت دو یا چند حلال و یا ترکیب متغیر با زمان (برنامه زمانی) استفاده شود که به این سیستم باینری و یا کواترنری یا چند حلاله و یا گرادیانت می گویند. سیستم های باینری معمولا از سر هم بندی یا کوپلینگ 2 پمپ همزمان ساخته می شوند و در مواقعی با استفاده از یک سیستم شیر چهار مسیره قابل کنترل با کامپیوتر که به ورودی پمپ متصل شده می توان از ترکیب ثابت و یا متغیر با زمان همه حلال ها استفاده نمود.
انژکتور (Injector)
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
انژکتور (Injector) در واقع نقش تزریق کننده نمونه مورد آنالیز به داخل حلال عبوری را در دستگاه کروماتوگراف مایع بازی می کند. این بخش سیستمی است متشکل از چند مسیر که می تواند بین پمپ و ستون قرار گرفته و بتواند در حین عبور حلال یا فاز حامل با فشار زیاد مقدار معینی از نمونه را به داخل آن هدایت نماید. مقدار ثابت نمونه در داخل لوله ای با حجم مشخص به نام لوپ در کمین نشسته تا در لحظه فرمان کاربر سوار موج حلال شده و به سمت ستون کروماتوگرافی حرکت نماید. انژکتور اتوماتیک و یا Autosampler نیز نوع رباتیک این سیستم می باشد که می تواند تعداد بسیار زیادی از نمونه را طبق برنامه داده شده کاربر به داخل حلال تزریق نماید.
ستون (Column)
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
ستون کروماتوگرافی و یا column مرکز جداسازی اجزای نمونه در کروماتوگرافی مایع است. ستون HPLC لوله ای است فلزی که با مواد نیمه تراوا از جنس خاک دیاتومه با خلل و فرج فراوان پر شده است که حلال و نمونه حل شده تنها با اعمال فشار از داخل آن عبور داده می شود. عملکرد این ستون ها به زبان ساده نگهداری و رها سازی مولکول های جزء به جزء ترکیب به ترتیب بزرگی و یا چسبندگی مولکول ها و قدرت شستشوی نمونه توسط حلال می باشد. ستون ها بسته به جنس محتوا و قطبیت و طول دارای انواع بسیار متنوعی می باشند که از مصطلح ترین آن ها ستون C18 و C8 می باشد.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
دتکتور دستگاهی است که بنابر خاصیتی مثل میزان جذب می تواند غلظت نمونه را دستگاه کروماتوگراف مایع بسنجد، در بیشتر موارد دتکتور کروماتوگراف یک سیستم اسپکتروفتومتر است که در طول موج خاصی می تواند مقدار و نوع نمونه را نمایش دهد و این دتکتور SPD نامیده می شود. از دیگر دتکتور های کروماتوگراف می توان از دتکتور RID نام برد که بر اساس ضریب شکست نمونه آن را شناسائی و مقدارسنجی می نماید. دتکتور RF، براساس میزان فلورسانس نمونه. دتکتور MS براساس جرم مولکولی.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
کنترلر در دستگاه کروماتوگراف مایع بخشی است که ماژول های دیگر را کنترل نموده و ارتباط همه بخش ها و کامپیوتر را برقرار می نماید. در پایان اطلاعات اجزای ترکیب به صورت نمودار یا اصطلاحا کروماتوگراف روی نمایشگر قابل دستیابی است.
گازگیر (Degasser)
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
قبل از ورود حلال به داخل پمپ در دستگاه HPLC، باید هر گونه حباب هوا و یا گاز دیگر و یا هوای حل شده در حلال از آن زدوده شود. این کار به دو روش تزریق گاز بی اثر مثل آرگون در داخل حلال در حین لرزاندن حلال و دیگری استفاده از دستگاه گازگیر صورت می گیرد. امروزه در دستگاه HPLC بیشتر از دستگاه Degasser استفاده می شود که سیستم نیمه تراوای داخل آن گاز را تراوش نموده ولی اجازه خروج مایع را نمی دهد.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
*فاز متحرک (Mobile phase) : گاز یا مایعی است که در سیستم جریان دارد و باعث جابجایی و حرکت نمونه در طول ستون می شود.
*فاز ساکن: (Stationary phase) فاز جامد یا مایع سیستم کروماتوگرافی است که مواد بر روی آن جداسازی و یا جذب می شوند.
*نمونه:(Sample) ترکیبی است اغلب مایع که به جهت آنالیز و اندازه گیری به دستگاه تزریق می شود.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
این یک فرآیند جداسازی کروماتوگرافی است که در آن ماده مورد بررسی از طریق یک ستون به اصطلاح جداسازی که شامل فاز ثابت همراه با یک فاز متحرک همچنین به نام “شباع کننده” یا “شوینده” نیز نامیده می شود، پمپ می شود. یک ستون جداسازی در دستگاه HPLC بین 18 تا 300 میلی متر طول دارد و در مورد سیستم های HPLC تحلیلی عمدتاً دارای قطر داخلی 2 تا 4.6 میلی متر است. قدرت جداسازی HPLC حدود 100 برابر بیشتر از کروماتوگرافی ستونی است.
به دلایل اقتصادی، یک فیلتر به اصطلاح پیش ستون یا فیلتر ستون اغلب در بالادست نصب می شود. این یک ستون کوتاه یا یک دیسک فیلتر است که از همان مواد ستون جداسازی ساخته شده است تا آلاینده ها را از ستون اصلی دور نگه دارد. HPLC همچنین برای خالص سازی مواد به عنوان HPLC آماده سازی (نیمه) استفاده می شود. قطر داخلی می تواند به طور قابل توجهی بزرگتر باشد، زیرا تصفیه می تواند تا مقیاس تولید انجام شود. ستون های آماده سازی برای مقیاس آزمایشگاهی دارای قطر 10 یا 25 میلی متر هستند.
اگر یک جزء از ماده مورد بررسی به شدت با فاز ساکن تعامل داشته باشد، برای مدت نسبتا طولانی در ستون باقی می ماند. از طرف دیگر، اگر با فاز ساکن برهمکنش ضعیفی داشته باشد، زودتر از ستون خارج می شود. بسته به قدرت این فعل و انفعالات، اجزای تشکیل دهنده ماده در زمانهای مختلف (زمانهای ماندگاری) در انتهای ستون جداسازی ظاهر میشوند و سپس با یک آشکارساز مناسب میتوان آنها را شناسایی کرد. برای فاز معکوس، زمان ماند یک ماده به زمان باقی ماندن آن در فاز ثابت (فیلم حلال در اطراف زنجیره های آلکیل سیلیکاژل اصلاح شده) بستگی دارد. مرحله ای که نرخ را تعیین می کند “انحلال” (داجذب) به فاز متحرک است.
یک فاز ثابت قطبی (به عنوان مثال سیلیکاژل / سیلیکاژل) در NP-HPLC استفاده می شود. قدرت خروجی فاز متحرک به طور کلی به قطبیت بستگی دارد. هرچه فاز متحرک قطبی تر باشد، ماده سریعتر شسته می شود. مولکول های قطبی نسبت به مولکول های غیرقطبی مدت زمان بیشتری روی ستون جذب / کند می شوند (حفظ می شوند) و بنابراین بعداً ستون را ترک می کنند. فازهای معمولی این عیب را دارند که معمولاً فقط با حلالهای آلی میتوان کار کرد و نه با مواد شوینده آبی. کروماتوگرافی برهمکنش هیدروفیلی (HILIC) راهی برای برون رفت از این مشکل ارائه می دهد. در HILIC، فازهای ثابت قطبی به طور مشابه با انتخاب NP استفاده میشوند، اما آنها به عنوان شوینده با سیستمهای بافر آبی کار میکنند. با این حال، برخلاف کروماتوگرافی RP، آب قویترین ماده شوینده در HILIC است.
RP-HPLC رایج ترین روش در عمل است. حدود 70 درصد از تمام جداسازی های HPLC تحلیلی جداسازی RP است. در اینجا از یک فاز ثابت غیر قطبی استفاده می شود و قدرت شستشوی فاز متحرک با افزایش قطبیت کاهش می یابد. فاز ساکن با واکنش سیلان هایی که با هیدروکربن های زنجیره بلند با سیلیکاژل جایگزین شده اند تولید می شود. سطح قطبی ذرات سیلیکاژل با یک لایه غیر قطبی از آلکان ها پوشیده شده است، یعنی قطبیت کاهش می یابد. معمولاً از مخلوط آب مقطر یا بافر و استونیتریل یا متانول به عنوان فاز متحرک استفاده می شود. در جداسازی های ایزوکراتیک، ترکیب فاز متحرک در تمام مدت یکسان باقی می ماند. در مورد جداسازی گرادیان، قطبیت مخلوط حلال در طول تجزیه و تحلیل تغییر می کند.
RP-HPLC به ویژه برای جداسازی آنالیتهای قطبی استفاده میشود، که زمانهای ماندگاری زیادی در فازهای عادی دارند. تشخیص بیشتر با استفاده از آشکارساز UV یا فلورسانس انجام می شود. ترکیبات با طیفسنجهای جرمی ساده (MS) یا طیفسنجهای جرمی پشت سر هم بیشتر و بیشتر مورد استفاده قرار میگیرند.
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
✅معرفی اجزای تشکیل دهنده دستگاه HPLC
✅جهت مشاهده دوره HPLC (دوره کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) با گواهینامه های معتبر ملی و بین المللی کلیک نمایید.
✅دوره های ISO (دوره های ایزو) کلیک نمایید
✅دوره های مدیریت کلیک نمایید
✅دوره های HSE (دوره های ایمنی) کلیک نمایید
✅دوره های صنایع غذایی کلیک نمایید
✅دوره های انبارداری کلیک نمایید
✅دوره های هتلداری کلیک نمایید
✅دوره های کیترینگ کلیک نمایید